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Los itinerarios guiados por el Parque Nacional se desarrollan sobre trazados concretos que sólo sufren modificaciones por cuestiones estacionales o de preservación puntual de espacios o ecosistemas. Pueden realizarse en cualquier momento del año.
En la actualidad, el Parque Nacional de Doñana pone a disposición del visitante dos itinerarios diferentes: el Itinerario "Acebuche-La Plancha-Acebuche", que se realiza en vehículos todo-terreno, y el Itinerario fluvial Sanlúcar-Guadalquivir-Doñana, que se realiza en el buque Real Fernando.

El itinerario tiene una duración de 4 horas aproximadamente, durante las que se recorre una distancia de unos 70 km a través de los ecosistemas más característicos del Parque.
Es conveniente realizar reserva previa de plazas, ya que éstas están limitadas a de 258 personas por día. Las reservas se pueden concertar en el Centro de Visitantes El Acebuche o llamando al teléfono 959.43.04.32. Fax: 959.43.04.51.
El itinerario sale del Aparcamiento del Centro de Visitantes el Acebuche. Desde aquí se dirige al Sur del Parque. Bordea la urbanización de Matalascañas por la Carretera Norte, introduciéndose a continuación en el Parque Nacional.
Surge el primer encuentro con las dunas que precede al espectacular recorrido por los 30 km de playas vírgenes de Doñana, donde el marisqueo o la presencia de las torres almeneras construídas en el siglo XVI, nos atestiguan la dinámica del litoral atlántico.
Según el estado de las mareas, se proseguirá bien a través del Carril del Carbonero o bien a través del Pinar del Faro en las inmediaciones de la desembocadura del Guadalquivir. Entrando por Carbonero se sigue la dirección del avance dunar, recorriéndose los distintos frentes dunares y corrales y desembocando en el Cerro de los Ánsares. Frente a esta gran duna se realizará una parada, en la que será posible disfrutar de sus finas arenas y comprobar la dinámica del sistema.
A partir de aquí se produce un acercamiento a la vera y a continuación a la marisma, que se irá bordeando hasta llegar a Vetalengua, donde existe un observatorio de aves, especialmente interesante durante la época de inundación de la marisma.
Se continúa hasta el Lucio del Membrillo y desde aquí se entra en el Pinar de Marismillas, se pasa por el Palacio del mismo nombre y por el Poblado de la Plancha, apreciando los Llanos y el último tramo del río Guadalquivir, en cuya desembocadura se inicia el camino de regreso por la playa y hasta el Centro del Acebuche.